A profundidade de campo (DOF) de um microscópio é a faixa de distâncias da lente objetiva na qual os objetos aparecem em foco nítido. É determinado pela abertura numérica (NA) da lente objetiva e pelo comprimento de onda da luz utilizada.
O DOF é inversamente proporcional ao NA, o que significa que uma lente objetiva com NA mais alto tem um DOF menor. Isso ocorre porque uma lente objetiva de NA mais alta tem um cone de luz mais estreito, o que significa que ela foca em uma área menor da amostra.
O DOF também é inversamente proporcional ao comprimento de onda da luz, o que significa que um comprimento de onda de luz mais curto tem um DOF menor. Isso ocorre porque comprimentos de onda mais curtos de luz são difratados mais facilmente, o que significa que eles se espalham mais à medida que passam pela lente objetiva.
O DOF de um microscópio é importante porque determina a espessura da amostra que pode ser visualizada com foco nítido. Uma amostra mais espessa que o DOF aparecerá embaçada ou fora de foco.
O DOF pode ser aumentado usando uma lente objetiva de NA inferior ou usando um comprimento de onda de luz mais longo. No entanto, isto também diminuirá a resolução do microscópio. Portanto, é importante encontrar um equilíbrio entre DOF e resolução ao escolher uma lente objetiva para uma aplicação específica.
O DOF de um microscópio pode ser calculado usando a seguinte fórmula:
$$ DOF =\frac{2(n/NA)^2}{\lambda} $$
Onde:
* DOF é a profundidade de campo em micrômetros
* n é o índice de refração do meio de imersão
* NA é a abertura numérica da lente objetiva
* λ é o comprimento de onda da luz em micrômetros
